目的 建立一种定量检测外周血细胞酪氨酸激酶2(JAK2)基因V617F突变率的等位基因特异性实时荧光定量PCR(AS-qPCR)方法.方法 在AS-qPCR基础上,引入1条锁核酸(LNA)修饰的寡核苷酸探针,用以选择性抑制AS-qPCR中突变引物对野生等位基因的非特异性扩增,定量检测JAK2 V617F突变率,称之为AS-LNA-qPCR法.通过AS-LNA-qPCR法测定样本的循环阈值(Ct值),根据AS-LNA-qPCR法检测不同JAK2 V617F突变率标准品的Ct值,绘制标准曲线,根据标准曲线直接获得检测样本中JAK2 V617F突变率.我们对该方法标准品的批内、批间检测结果进行了评价,并对623名表观健康人外周血细胞基因组DNA中JAK2V617F突变进行检测,以探讨其临床应用价值.结果 AS-LNA-qPCR法定量检测JAK2 V617F突变率的下限可达到0.01％,批内、批间平均变异率分别是6.3％和8.6％.对623名表观健康人外周血细胞基因组DNA中JAK2 V617F突变检测显示,其中19名(3％)表现健康人JAK2 V617F突变阳性,突变率变化范围为0.01％ ～5.49％.结论 AS-LNA-qPCR方法直接定量检测外周血细胞JAK2 V617F突变率,具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合临床上用于对骨髓增殖性疾病诊断、疾病进程评估和疗效的监测.
作者：邵冬华；梁国威；何美琳；曹清芸
来源：中华血液学杂志 2013 年 34卷 5期
