目的 构建携带色素上皮衍生因子(PEDF)基因的慢病毒(LV)载体并转染人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),初步探讨基因修饰PEDF-间充质干细胞的可行性.方法 采用基因重组方法构建LV-PEDF载体,测定其LV滴度,以感染复数(MOI)值为10、30、50的LV体外转染hUCMSCs,并据此分为相应MOI值实验组;以不含PEDF基因的相同MOI值的重组LV载体[LV-绿色荧光蛋白(GFP)]转染hUCMSCs,并据此分为相应MOI值对照组.荧光显微镜观察两组细胞转染效率并计算转染率.采用细胞免疫荧光法、免疫细胞化学法、实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平.结果 经酶切以及基因测序鉴定证明LV载体构建成功.转染96 h后,50MOI实验组细胞可见大量GFP表达,转染效率为72.1％.荧光显微镜观察发现,转染后96 h,50MOI实验组细胞胞浆PEDF、VEGF表达增强.光学显微镜观察发现,转染后96 h,50MOI实验组细胞胞浆PEDF表达较低,而VEGF表达较强.RT-PCR检测结果发现,50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF mRNA相对表达量分别为0.170±0.028、0.015±0.007;VEGF mRNA相对表达量分别为0.265±0.022、0.285±0.049.两组细胞中PEDF mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=70.29,P＜0.001);VEGF mRNA相对表达量比

作者：段红涛；陈松；董蒙；王月欣；孔佳慧；宋建；李泽东；王继明

来源：中华眼底病杂志 2017 年 33卷 6期