目的:探讨肠炎沙门菌
spvD基因对人克隆结肠腺癌Caco-2细胞侵袭力及胞内增殖力的影响。
方法:利用自杀质粒介导的同源重组技术构建
spvD基因缺失株，PCR扩增并克隆
spvD基因于pBAD33表达载体获得回补质粒，导入相应缺失株得到回补株，并将pBAD33导入野生株及缺失株作为空载对照。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测
spvD mRNA表达水平。以Caco-2细胞作为体外模拟人肠上皮细胞模型，分别将野生株、缺失株及回补株与其共培养，探究
spvD基因对Caco-2细胞的毒力。使用LSD-
t检验进行3组间
spvD mRNA表达水平比较及胞内活菌数比较，使用χ2检验进行3组间侵袭率的比较。
结果:以野生株
spvD mRNA表达量作为单位“1”，缺失株为“0.00”、回补株为“2.60”（LSD-
t野生株，缺失株=1.11，
P=0.31；LSD-
t野生株，回补株=-1.77，
P=0.13；LSD-
t缺失株，回补株=-2.88，
P=0.03），该结果证实了缺失株及回补株的成功构建。上述3组肠炎沙门菌对Caco-2细胞的侵袭实验结果显示，野生株侵袭率为0.23
作者：侯悦；逄波；李哲；赵强；刘洁
来源：中华预防医学杂志 2022 年 56卷 4期
