目的探讨大鼠角膜碱烧伤后差异基因表达情况,克隆目的基因片段并了解其同源性,检测有无新基因产生, 从分子角度阐明角膜碱烧伤后变性蛋白产生的分子生物学基础.方法采用异硫氰酸胍法提取大鼠角膜碱烧伤后3 d和2周的角膜RNA,合成双链cDNA.分别以正常角膜和碱烧伤角膜的cDNA为模板,应用2种锚定引物和12种随机引物,进行24种不同引物组合的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR),对目的基因进行克隆、克隆鉴定、测序及同源性分析.结果在相同PCR反应条件下,同正常角膜相比,碱烧伤2周的角膜产生1条差异性条带,分子量为630 bp.对该片段进行克隆和测序,并与Gene Bank进行同源性的比较,发现该基因与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的基因具有部分同源性.结论大鼠碱烧伤2周的角膜有差异基因产生,与大鼠线粒体细胞色素C氧化酶的亚单位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ具有部分同源性.该差异基因的产生可能与角膜碱烧伤后超氧自由基的作用有关.
作者：李雪；徐锦堂；崔浩；胡琦；杨晨霞
来源：中华眼科杂志 2005 年 41卷 10期
