目的研究单纯疱疹病毒胸腺激酶(HSV-tk)基因系统对人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)增殖的抑制作用及其作用机制.方法构建含HSV-tk基因的逆转录病毒载体pL(tk)SN并转入包装细胞系PT67进行病毒包装,G418筛选抗性克隆并扩大培养收集病毒上清,测定病毒滴度.透射电镜观察鉴定病毒颗粒;聚合酶链反应(PCR)技术鉴定tk基因在病毒基因组中的整合.用病毒感染HTFs细胞,G418筛选并扩大培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫印迹法检测tk基因的表达;加不同浓度前药更昔洛韦(GCV)后,以MTT法检测tk基因对HTFs细胞增殖的抑制作用;采用Hoechst 33258染色及流式细胞仪检测凋亡细胞;电镜观察细胞形态学改变.结果酶切鉴定结果显示成功构建了逆转录病毒载体pL(tk)SN,电镜下包装细胞产生的病毒颗粒呈椭圆形,直径约100 nm;病毒基因组中,PCR扩增出了tk基因;测得病毒滴度为4×107 cfu/ml;被转染的HTFs细胞,用RT-PCR及免疫印迹法检测到tk基因在mRNA与蛋白水平均有表达;HSV-tk-GCV系统对HTFs细胞增殖的抑制作用表现为剂量依赖性,5×10-3g/L的GCV作用5 d可将细胞全部杀死,IC50为6×10-4g/L,HSV-tk-GCV系统对HTFs细胞的杀伤机制表现为坏死与凋亡,凋亡率随GCV浓度的升高而增加.结论 HSV-tk基因系统能有效抑制人眼球筋膜囊成纤维细胞的
作者：王继兵；葛坚；刘炳乾；黄冰；魏雁涛
来源：中华眼科杂志 2006 年 42卷 3期
