目的 探讨胸腺素β4(Tβ4)对体外培养的兔角膜上皮细胞氧化损伤的影响.方法 实验研究.采用组织块培养法获得原代兔角膜上皮细胞并进行传代培养.采用形态学观察和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测成熟角蛋白(keratin) 12和缝隙连接蛋白(connexin) 43的表达情况,对细胞进行鉴定.以H2O2处理角膜上皮细胞制备体外细胞氧化损伤模型,并观测Tβ4对其保护作用.实验分为4组:正常对照组、Tβ4组、H2O2组和H2O2+ Tβ4组.采用MTT比色法检测角膜上皮细胞存活度；运用TUNEL染色观察角膜上皮细胞凋亡；利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平；通过划痕实验观察角膜上皮细胞的迁移运动能力.组间均数比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 培养的细胞呈圆形、卵圆形和多边形,铺路石样生长；RT-PCR法检测显示培养的细胞表达角膜上皮细胞特异性基因,keratin 12和connexin 43,呈现角膜上皮细胞的特征.经H2O2刺激后,角膜上皮细胞的存活率(67.20％±5.87％)较正常对照组显著下降(l00.00％±9.99％)(4个组间比较F=18.61,P=0.001,两两比较P=0.000)；H2O2+Tβ4组细胞存活率(83.42％±7.43％)与H2O2组(67.20％±5.87％)比较明显增高(P =0.023).4个组间细胞划痕实验结果的差异具有统计学意义(F =36.38,P=0.000
作者：李轩；姜志昕；郝朋；汤欣
来源：中华眼科杂志 2013 年 49卷 8期
