目的:探讨神经干细胞( NSC)与成熟视网膜色素上皮细胞( RPE)间相关基因的表达差异。方法分离小鼠原代RPE并进行扩增培养。应用反转录-聚合酶链反应鉴定眼区发育相关基因在NSC和RPE的表达,分析相关差异。进一步应用荧光定量聚合酶链反应( PCR)对共同表达的基因进行定量分析,比较两者差异。测量指标的数据资料以均数±标准差( x珋±s)的形式表示;采用独立样本t检验的方法分别比较NSC和RPE间各基因表达量的差异。结果原代分离后的小鼠RPE细胞呈圆形生长,细胞内充满色素颗粒,一般48 h后,细胞可稳定贴壁生长,部分细胞呈双核或多核,并逐渐呈三角形或多边形状伸展。培养7 d左右,细胞生长接近融合状态,进行RPE细胞的特异蛋白免疫荧光染色,可见细胞角蛋白及S-100等显著表达。在眼区发育相关的主要转录因子中,NSC特异表达Sox2 mRNA,RPE细胞特异表达Chx10、Opn4及RPE65 mRNA,两者均表达nestin、Pax6、R、Mitf、Hes1、Zo-1及tublin mRNA。在NSC和RPE共同表达的相关基因中,Pax6、Mtif、Rx,Hes1及ZO-1在RPE的相对表达量都显著高于其在NSC的表达,差异有统计学意义( t=-16.751,-5.439,-8.109,-4.96,-9.172;P <0.05)。而nestin在两类细胞的表达比较,差异无统计学意义(t=
作者:张敬学;武珅;刘谦
来源:中华眼科医学杂志(电子版) 2014 年 6期