目的探讨多功能抗凝多肽基因的克隆、表达的可行性及其活性的测定.方法设计一个具有双重抗凝功能的重组多肽分子结构,它由谷胱甘肽-S-转移酶(GST)作为载体蛋白与重组抗凝多肽融合而成.编码重组抗凝多肽的DNA序列是根据氨基酸序列逆向翻译后经人工合成,并插入表达质粒pGEX-5X-3中,与其中的编码GST序列的3′端融合.采用大肠杆菌DH5α进行原核表达.应用亲和层析的方法得到纯化的融合蛋白.重组抗凝多肽含有31个氨基酸,由3个功能部分组成:(1)Lys-Gly-Asp(KGD)氨基酸序列,可抑制血小板GpⅡb/Ⅲa受体与纤维蛋白原的结合;(2)纤维蛋白单肽A的7-16残基(FBA7-16),是凝血酶的抑制剂.(3)水蛭素C末端的12肽,可直接抑制凝血酶.结果纯化的融合蛋白能抑制二磷酸腺苷诱导的血小板聚集(100 μmol/L时其活性为对照组的20.7
作者:穆瑞斌;秦永文;查艳萍;荆清
来源:中华医学杂志 2002 年 82卷 9期