目的 探讨胃泌素促进人大肠癌细胞侵袭力增加的分子机制.方法 脂质体转染表达胃泌素受体(CCK-2R)的pCR3.1/GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆,逆转录PCR和免疫印迹鉴定,转染成功命名为Colo320WT.应用1×10-8 mol/L胃泌素以时间梯度0、1、6、12、48、48 h干预Colo320WT细胞,同时应用胃泌素受体拮抗剂L365,260干预Colo320WT细胞30 min,再加1×10-8 mol/L胃泌素干预12 h.免疫印迹检测Colo320WT细胞中的磷酸化黏着斑激酶(FAK)Tyr397和总FAK表达.共聚焦显微镜观察磷酸化FAKTyr397在板状伪足的定位表达.免疫共沉淀检测FAK-Src-p130Cas-Dock180信号复合物的形成.Pull-down测定Rac活性.结果 随着胃泌素干预时间的延长,磷酸化FAKTyr397的表达量呈增加趋势,且12 h达最大,但对总的FAK无明显影响,磷酸化的FAKTyr397/FAK比值分别为2.82
作者:曹俊;于皆平;周岚;宋文冲;罗和生;于红刚
来源:中华医学杂志 2007 年 87卷 24期