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目的 研究内源表达白细胞介素21(IL-21)对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)抗白血病的作用及其作用机制.方法 采集分离健康人外周血单个核细胞,加用细胞因子诱导培养CIK细胞,构建表达IL-21基因的慢病毒载体,感染CIK细胞并鉴定后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用;半定量反转录(RT)-PCR法检测CIK细胞干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TNF-3、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体(FasL)和NKG2D分子(NKG2D)的mRNA表达;流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体(IL-21 R)、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达;酶联免疫法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达.结果 经酶切与测序鉴定,IL-21慢病毒载体构建正确,共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达.(1)与空载体组相比,内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义(P=0.856),内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组(24.60%±2.10%比16.95%±4.70%,P=0.042).(2)内源表达IL-21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组(58.4%±8.3%比23.3%±2.8%,P=0.009),作用第5天时,杀伤作用仍能维持在61.2%±6.2%(P=0.003),相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率(4

作者:赵楠;赵明峰;Sajin Rajbhandary;卢文艺;朱海波;马立;游权;肖霞;邓琦

来源:中华医学杂志 2013 年 93卷 4期

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赵楠;赵明峰;Sajin Rajbhandary;卢文艺;朱海波;马立;游权;肖霞;邓琦
来源:
中华医学杂志 2013 年 93卷 4期
标签:
白血病 细胞因子诱导杀伤细胞 白细胞介素21 抗白血病作用 Leukemia Cytokine-induced killer cells Interleukin-21 Anti-leukemic effects
目的 研究内源表达白细胞介素21(IL-21)对外周血来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)抗白血病的作用及其作用机制.方法 采集分离健康人外周血单个核细胞,加用细胞因子诱导培养CIK细胞,构建表达IL-21基因的慢病毒载体,感染CIK细胞并鉴定后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CIK细胞的增殖能力及杀伤白血病细胞系K562细胞作用;半定量反转录(RT)-PCR法检测CIK细胞干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TNF-3、穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、Fas配体(FasL)和NKG2D分子(NKG2D)的mRNA表达;流式直接免疫标记法检测CIK细胞免疫表型、细胞表面IL-21受体(IL-21 R)、FasL及细胞内穿孔素、颗粒酶B的表达;酶联免疫法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达.结果 经酶切与测序鉴定,IL-21慢病毒载体构建正确,共转染CIK细胞中有目的基因IL-21的表达.(1)与空载体组相比,内源表达IL-21组总的细胞增殖之间差异无统计学意义(P=0.856),内源表达IL-21组CIK细胞阳性细胞数高于空载体组(24.60%±2.10%比16.95%±4.70%,P=0.042).(2)内源表达IL-21组CIK细胞对K562细胞的杀伤率高于空载体组(58.4%±8.3%比23.3%±2.8%,P=0.009),作用第5天时,杀伤作用仍能维持在61.2%±6.2%(P=0.003),相比外源性IL-21作用的CIK细胞的杀伤率(4