目的 探讨磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)和Notch信号通路对哮喘小鼠CD4+T淋巴细胞活化及增殖的协同调控作用.方法 以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备16只小鼠哮喘模型,按随机数字表法分为对照组和哮喘组各8只,免疫磁珠法分离哮喘小鼠脾脏原代CD4+T淋巴细胞.在细胞水平分组:未干预组(A组),PI3K抑制剂组(LY294002)(B组),Notch抑制剂组(γ-分泌酶抑制剂,DAPT)(C组),PI3K抑制剂+Notch抑制剂组(D组),均以10 μg/ml的植物血凝素和1000 U/ml的白细胞介素(IL)-2刺激增殖6h后进行干预;用流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞内的细胞周期蛋白(Cyclin)A、Cyclin D1和P27kip1的蛋白表达,反转录-PCR测定各指标的mRNA表达.结果 分选后CD4+T淋巴细胞纯度达90.0%±5.2%,CD4+T淋巴细胞的存活率为94.8%±3.2%.哮喘组小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞Cyclin A、Cyclin D1蛋白(28.0%±3.5%、14.9%±3.4%)和mRNA(0.55±0.16、1.38±0.42)表达水平均显著高于对照组(13.4%±3.5%、7.7%±1.8%和0.32±0.10、0.92±0.37)(P=0.002、0.036和P=0.007、0.042),而哮喘组P27 kip1蛋白和mRNA表达水平(23.3%±3.9%和0.16±0.03)均显著低于对照组(37.5%±5.8%和0.32 ±0.03,P=0.006和P=0.000).A、B、C、D各干预组哮喘CD4+T淋巴细胞Cyclin D1蛋白和mRN
作者:聂颖;杨邦坤;盛安群;张维溪;李昌崇
来源:中华医学杂志 2013 年 93卷 44期