目的 探讨抑癌基因p14ARF增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性及其作用机制.方法 使用顺铂处理不表达p14ARF的U2OS细胞和稳定表达p14ARF的U2OS-ARF细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞毒作用和半数抑制浓度值;流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p53以及其下游基因Bax、p21、Mdm2、Fas的表达;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9蛋白酶的活性.结果 顺铂处理72 h后,U2OS、U2OS-vec和U2OS-ARF组的细胞活力分别为(84.8％±4.4％)、(86.9％±5.0％)和(66.7％±4.6％),相比U2OS-ARF的细胞活力明显降低,U2OS、U2OS-vec和U2OS-ARF组的IC50分别为(15.8±0.9)、(16.3±0.6)μmol/L和(8.9±0.8)μmol/L,相比U2OS-ARF的IC50明显降低(P＜0.05).流式细胞术和形态学鉴定表明相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞表现更为明显的凋亡比例和凋亡特异性形态学变化.在U2OS-ARF细胞中,p53、Mdm2和p21的基础表达水平稍稍高于U2OS-vec对照细胞,顺铂处理在U2OS-vec和U2OS-ARF细胞均明显激活p53、Mdm2和p21的表达,但在U2OS-ARF细胞中更加明显;另外,顺铂处理对U2OS-vec细胞中Bax和Fas的表达没有影响,却在U2OS-ARF细胞中明显增强了Bax的表达,但对Fas无影响.p14ARF还增

作者：原向伟；黄秀芳；陈忠羡；梁胜根；廖威明

来源：中华医学杂志 2014 年 94卷 43期