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目的 探讨β-连环素通路对转化生长因子β1(TGF-β1)致肺纤维化的调控作用.方法 体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN细胞)分为四组:A1.对照组;B1.加5μg/L TGF-β1的TGF-β1组;C1.转染真核表达载体pcDNAβ.0(pcDNA)后加5μg/L TGF-β1的pcDNA+ TGF-β1组;D1.转染β-连环素敲除载体[F-(β-TrCP)-Ecad]后加5μg/L TGF-β1的F-(β-TrCP)-Ecad+ TGF-β1组.24 h后,显微镜下观察各组细胞形态,Western印迹法检测各组细胞上皮钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(Fn)表达;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞培养上清液中促纤维化转录产物Snail mRNA的表达.体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞(CRL-2192细胞)分为五组:A2.对照组;B2.加20μg/L干扰素γ的干扰素γ组;C2.加10 μg/L TGF-β1和20 μg/L干扰素γ的TGF-β1+干扰素γ组;D2.转染F-(β-TrCP)-Ecad后加入C2组相同试剂的F-(β-TrCP)-Ecad+TGF-β1+干扰素γ组;E2.转染野生型β-连环素表达载体(WTβ-连环素)后加入C2组相同试剂的WTβ-连环素+TGF-β1+干扰素γ组.24h后,Western印迹法检测A2、B2、C2组中β-连环素蛋白的表达;RT-PCR检测各组细胞培养上清液诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达.结果 B1、C1组RLE-6TN细胞形态变为梭形,D1组

作者:田新瑞;田新利;王慧芳;常琴;霍如婕;殷得莉;郑国平

来源:中华医学杂志 2016 年 96卷 24期

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作者:
田新瑞;田新利;王慧芳;常琴;霍如婕;殷得莉;郑国平
来源:
中华医学杂志 2016 年 96卷 24期
标签:
肺纤维化 β连环素 转化生长因子β1 上皮细胞-间质转化 巨噬细胞 Pulmonary fibrosis Beta catenin Transforming growth factor betal Epithelial-mesenchymal transition Macrophages
目的 探讨β-连环素通路对转化生长因子β1(TGF-β1)致肺纤维化的调控作用.方法 体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN细胞)分为四组:A1.对照组;B1.加5μg/L TGF-β1的TGF-β1组;C1.转染真核表达载体pcDNAβ.0(pcDNA)后加5μg/L TGF-β1的pcDNA+ TGF-β1组;D1.转染β-连环素敲除载体[F-(β-TrCP)-Ecad]后加5μg/L TGF-β1的F-(β-TrCP)-Ecad+ TGF-β1组.24 h后,显微镜下观察各组细胞形态,Western印迹法检测各组细胞上皮钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(Fn)表达;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞培养上清液中促纤维化转录产物Snail mRNA的表达.体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞(CRL-2192细胞)分为五组:A2.对照组;B2.加20μg/L干扰素γ的干扰素γ组;C2.加10 μg/L TGF-β1和20 μg/L干扰素γ的TGF-β1+干扰素γ组;D2.转染F-(β-TrCP)-Ecad后加入C2组相同试剂的F-(β-TrCP)-Ecad+TGF-β1+干扰素γ组;E2.转染野生型β-连环素表达载体(WTβ-连环素)后加入C2组相同试剂的WTβ-连环素+TGF-β1+干扰素γ组.24h后,Western印迹法检测A2、B2、C2组中β-连环素蛋白的表达;RT-PCR检测各组细胞培养上清液诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达.结果 B1、C1组RLE-6TN细胞形态变为梭形,D1组