目的 建立并评价Sanger测序技术在诊断运动神经元存活基因1(SMN1)复合杂合突变型脊髓性肌萎缩症(SMA)病例中的意义.方法 选取首都儿科研究所2014年1月至2016年6月就诊的52例SMA患儿,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增52例患儿的SMN1和SMN2基因第7外显子,Sanger测序通过识别扩增片段中SMN1和SMN2基因固有差异碱基的峰高,判断SMN1基因纯合或杂合缺失.当SMN1基因杂合缺失时,经PCR-Sanger测序筛查SMN基因所有外显子、外显子与内含子交界区域的变异位点.最后通过多重连接探针扩增(MLPA)方法验证SMN1基因杂合缺失,并利用克隆测序确定突变点来自SMN1基因,完成SMN1基因复合杂合突变的确诊.结果 经Sanger测序检测的52例SMA患儿中47例为SMN1基因纯合缺失,5例为SMN1基因杂合缺失.MLPA方法验证了后5例患儿SMN1基因拷贝数均为1,Sanger测序检测出5例患儿均存在SMN基因点突变,并通过克隆Sanger测序验证了5例患儿突变均位于SMN1基因.结论 Sanger测序技术适用于SMN1基因复合杂合突变病例的诊断,对提高SMA基因诊断率具有临床意义.
作者：杨兰；曹延延；瞿宇晋；白晋丽；王红；金煜炜；韩蕴丽；宋昉
来源：中华医学杂志 2017 年 97卷 6期
