目的构建人组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达;探索重组TFPI-2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞(A2780)迁徙浸润能力的影响.方法 1.以TFPI-2 cDNA为模板,PCR扩增得到645 bp DNA片段,克隆入表达载体pET28a,并转化大肠杆菌BL21株表达.2.限制性内切酶和菌落PCR法鉴定TFPI-2基因DNA片段,Western blot法鉴定TFPI-2融合蛋白.3.建立TFPI-2抑制纤溶酶的动力学方法并测定重组TFPI-2对纤溶酶的抑制作用.4.在体外用Boyden小室,以不同浓度TFPI-2作用A2780细胞进行迁徙和浸润实验.结果 1.成功构建重组TFPI-2的原核表达载体pET28a并在BL21株中表达、纯化,获得大量TFPI-2蛋白.2.Western blot证实表达的融合蛋白为TFPI-2.3.重组TFPI-2对液相和固相中的纤溶酶具有显著抑制作用,且呈剂量-效应关系.4.在迁徙实验中,将A2780-TFPI-2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较,经t检验,无统计学意义(P>0.05);在浸润实验中,将A2780- TFPI-2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较及TFPI-2不同浓度组间的细胞数进行比较,经t检验,具有显著差异(P<0.01).结论 1.人TFPI-2基因的表达,为TFPI-2病理生理的作用和临床研究提供了丰富材料.2.重组TFPI-2抑制纤溶酶活性

作者：宁勇；黄瑞滨；宋善俊

来源：中华检验医学杂志 2005 年 28卷 11期