目的 构建人铁蛋白轻链基因的原核表达载体,并评价与探讨能在大肠埃希菌(E.coli)中过表达的人铁蛋白轻链所制备的基因rFL质控品的均匀性、稳定性和精密度以及应用价值.方法 采用RT-PCR从人新鲜全血总RNA克隆铁蛋白轻链(ferritin L)基因,构建亚克隆质粒pGM-T/ferritin L;用测序鉴定后,将重组质粒pET-30a/ferritin L转化E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导rFL表达;采用SDS-PAGE对rFL进行鉴定,用WB分析其抗原性,ACCESS免疫分析仪测定其浓度.同时,采用随机数表从制备的rFL质控品中抽取15支,用单因素方差分析评价质控品的均匀性;用一元线性回归分析评价质控品的稳定性,再根据评价结果计算均匀性和稳定性的不确定度,然后进行精密度评价.结果 构建的铁蛋白轻链原核表达体系经测序显示,扩增的ferritin L基因片段与GenBank中的ferritin L编码序列(NM_000146.3)一致;PCR扩增出与ferritin L DNA的527 bp相符的片段;用IPTG诱导表达后,可得到表达量高的相对分子质量为19 000的rFL,WB证明其具有良好的抗原性;用ACCESS测定rFL稀释1 000倍后的浓度为(1 115.84±38.38) ng/ml.均匀性评价结果显示,高低2个浓度基因rFL质控品样本内和样本间的差异均无统计学意义(高浓度和低浓度基因rFL质控品的F值分别为2
作者：赵瑾；尹利民；张曼
来源：中华检验医学杂志 2011 年 34卷 6期
