目的 探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值.方法 以已知K-ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT-29 DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性.对含不同比例(2%、3%、5%、10%、20%、30%和50%)结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA混合样本采用焦磷酸测序法进行基因突变率检测,并与Sanger测序结果平行进行Fisher精确检验比较,评价其灵敏度.同时用焦磷酸测序法检测分析30份临床结直肠癌患者石蜡包埋组织中K-ras基因第12和13密码子突变.结果 当混合已知突变类型的结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA样本突变DNA比例在5%和10%浓度时,Sanger测序法检出K-ras基因突变率分别为33.3% (4/12)和58.3% (7/12),焦磷酸测序法分别为91.7%(11/12)和100%( 12/12),且2种方法检出K-ras基因突变率的差异有统计学意义(P<0.05).此外,用焦磷酸测序法从30例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本中检出K-ras基因外显子2第12和13密码子突变10例,均为杂合型突变,突变率为33.3% (10/30).最常见的突变类型为G>A转换[50%(5/1O)]和G>T颠换[(30%(3/10)].结论 焦磷酸测序法检测结直肠癌K-ras基因外显子2第12和13密码子突变具有敏感、准确的优点,可用于
作者:谢国化;姚晓虹;吴萍;沈立松
来源:中华检验医学杂志 2012 年 35卷 7期