目的 建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑中巨细胞病毒(CMV)DNA的实验方法,并评价方法的最低检测限、精密度、特异性和临床应用能力.方法 确立CMV-gB段的引物和探针,构建标准质粒,检测CMV毒株的浓度.荧光定量PCR法检测10倍梯度稀释的病毒株干血斑,获得方法的最低检测限和批内、批间精密度.2011年9月至2013年2月收集复旦大学附属儿科医院10份确诊先天性CMV感染以及120份普通人群中出生3d内的新生儿干血斑标本,以本方法进行验证.结果 CMV DNA的最低检测限为4.44×103拷贝/ml;检测灵敏度为2.66拷贝/25μl反应体系.CMV毒株浓度为4.44×106拷贝/ml时检测CMV DNA的批内、批间精密度分别为0.74％和1.39％;CMV毒株浓度为4.44 ×104拷贝/ml时批内、批间精密度分别为1.04％和1.84％.10份确诊先天性CMV感染的标本中,8份CMV DNA阳性;120份新生儿标本中,2份CMV DNA阳性.阳性标本经套式PCR复测以及测序验证均为CMV阳性.结论 成功建立了一种可用干血斑中微量CMV检测的荧光定量PCR法,该方法快速、灵敏、精密度高,适用于大规模新生儿先天性CMV感染的筛查.
作者：董妞妞；苏犁云；叶丽静；钟华清；俞蕙；曹凌峰；董左权；徐锦
来源：中华检验医学杂志 2014 年 37卷 4期
