目的：建立一种血清循环B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1（ Bmi-1）信使核糖核酸（mRNA）直接逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR-D）检测方法，并运用该方法对结直肠癌血清循环Bmi-1 mRNA水平进行分析，探讨其在结直肠癌诊断中的价值。方法方法学建立。提取结直肠癌HT29细胞株RNA，建立Bmi-1、泛素C （ UBC）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（ GAPDH） mRNAs检测标准曲线，计算扩增效率。利用RT-qPCR-D方法对血清、准备液混合液中Bmi-1 mRNA进行直接检测，通过熔解曲线评价试验的特异性，以及血清样本稀释观察方法的检测下限。并且，用该方法检测2008年1月至2009年1月山东大学齐鲁医院158例结直肠癌患者，其中Ⅰ期26例、Ⅱ期53例、Ⅲ期47例和Ⅳ期32例，以及53例结直肠镜检查正常者血清循环Bmi-1 mRNA水平，采用Kruskal-Wallis H、Mann-Whitney U检验比较各组Bmi-1 mRNA表达水平，受试者工作特征曲线（ ROC）分析其对结直肠癌的检测效能。结果 Bmi-1、UBC、GAPDH log值与定量循环（ Cq ）值间呈良好线性关系（R2＝0.990、0.990、0.99，P均＜0.001），扩增效率（E）分别为0.875、0.917、0.935。建立的RT-qPCR-D方法，检测Bmi-1、UBC、GAPDH mRNAs的熔解曲线峰值单一；检测下限可达1.25μl。运用该方法检

作者：张欣；王海燕；郑桂喜；王丽丽；李培龙；刘童；杨咏梅；杜鲁涛；李娟；王传新

来源：中华检验医学杂志 2014 年 9期