目的:明确铁载体毒力基因
entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)毒力的影响。
方法:从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株,规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)-Cas9基因敲除技术构建
entB基因缺失株Δ
entB、回补株C-Δ
entB,并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、Δ
entB、C-Δ
entB菌株的菌落形态并进行拉丝试验,初步了解
entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线,测定
entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S(CAS)检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型,观察小鼠生存率直观了解
entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示,服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较,不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。
P<0.05表示差异具有统计学意义。
结果:PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。
entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。Δ
entB组的生长速度明显快于CRKP-27组(
P=0.008)和C-Δ
entB组(
P=0.001
作者:韩睿辉;牛敏;刘淑敏;毕建蝶;杜艳
来源:中华检验医学杂志 2022 年 45卷 6期