目的 建立基于多重置换扩增及测序技术的胚胎植入前HLA分型方法.方法 随机选取9对自愿捐献外周血和废弃胚胎的夫妇,取D3废弃的1PN、2PN、3PN受精胚胎,取单个或两个卵裂球细胞,采用多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)进行全基因组扩增,对单个或两个卵裂球的MDA产物采用PCR扩增HLA-DR、DQ第2外显子,然后对扩增产物进行直接双向测序分型(sequencing based typing,SBT),确定胚胎HLA基因型;提取其父母外周血基因组DNA,采用同样的方法确定其HLA基因型;然后比较父母与胚胎之间HLA基因型,确定9个家庭成员各自的HLA单倍型及其遗传关系,并在废弃胚胎之间进行HLA配型.结果 76个废弃胚胎被分为两组:单卵裂球组36个胚胎,两个卵裂球组40个胚胎.单卵裂球组扩增成功率为94.1％;两个卵裂球组扩增成功率为100％.共有74个胚胎MDA扩增成功.其产物行PCR-SBT检测,阳性率为100％.单卵裂球组MDA产物测序阳性率为100％,DQ等位基因脱扣率为1.5％,DR等位基因脱扣率为0.两个卵裂球组MDA产物测序阳性率为100％,DQ、DR等位基因脱扣率均为0.胚胎HLA单倍体重新组合率为20.2％(30/148).废弃胚胎之间HLA配型一致的比例为20.3％(15/74).比理论值25％略低,可能与本实验使用分级差、异常受精胚胎有关.结论 植入前遗传学诊
作者：张印峰；罗海宁；张云山
来源：中华医学遗传学杂志 2015 年 32卷 6期
