目的:建立可用于确诊先天性维生素K依赖性凝血因子缺乏症1(vitamin K-dependent coagulation factor deficiency 1，VKCFD1)疾病的细胞体系。方法:在稳定表达报告基因FIX-Gla-PC的HEK293细胞中，应用CRISPR/Cas9技术敲除
GGCX基因；通过ELISA、DNA测序、Western印迹等方法鉴定
GGCX基因敲除的单克隆细胞。用快速点变异的方法构建致病性
GGCX变异体质粒；用ELISA方法检测
GGCX变异对报告基因的影响。
结果:首先用ELISA方法筛选到两株报告基因无活性的单克隆细胞；之后DNA测序结果和Western印迹验证
GGCX基因发生了编辑和敲除；最后通过转染野生型
GGCX基因，可以恢复报告基因的活性，提示成功筛选到两株
GGCX基因敲除的单克隆细胞。在筛选到的细胞株中转染已知可导致VKCFD1的
GGCX变异体，发现报告基因活性在致病性变异体中显著降低。
结论:成功构建了检测GGCX活性的细胞体系，该体系可以用于诊断
GGCX变异导致的VKCFD1。
作者：高稳稳；刘红丽；苏改改；徐亚奇；王一伊；崔龙腾；黄蓉；杨海平；高蒙；席守民；沈国民
来源：中华医学遗传学杂志 2020 年 37卷 8期
