目的 探索从抽吸物中脂质和液体部分分离、体外培养脂肪组织来源干细胞的新方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定比较.方法 抽脂术后抽吸物分解为脂质和液体部分.脂质和液体部分分别用酶消化法和直接离心过滤法分离、培养ASCs,观察其在体外培养的形态学和生物学特点;MTT比色法测细胞活性,统计学分析;流式细胞仪测定细胞周期;随机选取3、4、6、8代做丫啶橙染色检测细胞的衰老;用流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性.结果 从吸脂抽吸物的脂质和液体两部分中都能培养出大量的ASCs,分别为PLA和LAF,呈成纤维细胞样贴壁生长,MTY测定细胞活性及细胞周期研究发现PLA、LAF这两种细胞的活力与增殖能力是非常相似的;丫啶橙染色3、4、6、8代细胞无明显衰老;流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CIM4、CD34的表达均呈阳性;免疫化学染色发现Ⅷ因子、CD31、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红O染色可见胞浆内有大量红染颗粒.成骨诱导2周后,细胞可见白色矿化钙盐沉积,茜素红染色可见成骨细胞红染.结论 本实验建立了一种自人体脂肪抽吸物中脂质和液体部分分离和培养
作者:朱茗;高建华;鲁峰
来源:中华整形外科杂志 2008 年 24卷 2期