目的:了解瘢痕疙瘩与正常皮肤组织中铁含量及转铁蛋白受体1(TfR1)表达水平,在体外构建Erastin诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)铁死亡模型,检测Erastin和铁抑制素-1(Fer-1)对细胞活力、亚铁离子(Fe
2+)含量及脂质过氧化物、铁死亡和纤维化相关调节因子的影响。
方法:收集2022年3至6月新疆医科大学第一附属医院6例瘢痕疙瘩组织与6例包皮组织,采用组织铁含量试剂盒测定2种组织真皮层中铁含量,Western blot法检测2种组织中TfR1蛋白表达情况。采用组织块培养法获取原代KFB和正常皮肤成纤维细胞(NFB),使用Erastin诱导KFB铁死亡模型并用CCK-8法检测不同浓度的Erastin和Fer-1对细胞活性的影响,筛选合适的药物浓度。后续实验分为5组:NFB组、control组、Erastin(0.6 μmol/L)组、Fer-1 (1 μmol/L)组、Erastin(0.6 μmol/L) +Fer-1(1 μmol/L)组,其中后4组采用KFB作为实验对象;采用划痕实验检测细胞迁移能力,荧光探针法和试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和Fe
2+含量;Western Blot法检测各组细胞中TfR1、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)表达水平,免疫荧光检测KFB中TfR1、Gpx4蛋白表达
作者:龚玲;李宇;李明轩;马娟;迟宏羽;董祥林
来源:中华整形外科杂志 2023 年 39卷 8期