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目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12

作者:夏肖萍;严杰;钊守凤;毛亚飞;李淑萍

来源:浙江大学学报(医学版) 2003 年 32卷 1期

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作者:
夏肖萍;严杰;钊守凤;毛亚飞;李淑萍
来源:
浙江大学学报(医学版) 2003 年 32卷 1期
标签:
大肠杆菌 LTB基因 霍乱弧菌 CTB基因 碱基序列 克隆,分子 LTB融合蛋白/免疫学 CTB融合蛋白/免疫学
目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12