目的:探讨10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性.方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9.应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9对其的体外切割效应.以DrzBC-9为例,观察不同浓度的MgCl2对体外切割效率的影响,根据Lineweaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、Kcat和Kcat/Km.结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt.在特定的切割条件下,DrzBC-7、DrzBC-8和DrzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 nt.以DrzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏MgCl2时,未见有切割反应.MgCl2浓度在150 mmol·L-1时达到最高切割效率,再提高MgCl2的浓度,切割效率未见明显增大.酶动力学参数Km、Kcat和Kcat/Km分别为1.4×10-9 mol·L-1,1.6 min-1和 1.1×109 mol·L-1·min-1.结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzyme在体外对相应的转录产物有特异切割作用.
作者：侯伟；沃健儿；刘克洲；李敏伟
来源：浙江大学学报（医学版） 2006 年 35卷 5期
