目的:研究人CYP3A4与POR和cyt b5用悬浮细胞共表达时的最佳条件.方法:悬浮培养Sf9细胞,分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间,以及3种病毒的加量比例等条件,并进行优化；然后,将表达产物制成微粒体后用于睾酮的代谢,并分别测其代谢活性.结果:当恒温摇床的温度为27℃,转速为90 r/min,每250 ml摇瓶中加入80～120 ml细胞密度为5×105个/ml的细胞液,并加入0.1％的Pluronic(R) F-68,细胞培养72 h时,最适合细胞的生长和目的蛋白的表达.此时,当3种病毒的加量比例为1∶1∶1时,表达条件最佳,其对底物睾酮代谢的Km值、Vmax和CLint分别为119.6 μmol/L、0.52 μmol/(min·g蛋白)和4.34 ml/(min·g蛋白).结论:通过三重共表达CYP3A4、POR、cyt b5,以及对表达条件的优化,提高了目的蛋白的表达量,得到了较高代谢活性的CYP3A4,从而为新药代谢及药物-药物相互作用研究奠定了基础,为药物代谢酶的大量表达提供了可行的方案.
作者：谢章明；刘文慧；徐迎春；陈枢青
来源：浙江大学学报（医学版） 2013 年 42卷 1期
