[目的]通过体外细胞实验，研究氧化型谷胱甘肽[glutathione(Oxidized)，GSSG]通过抑制细胞内肿瘤坏死因子( tumor necrosis factor-α，TNF-α)介导的核转录因子(nuclear transcription factors kappa B，NF-κB)的活化诱导肝细胞死亡的作用机制。[方法]以人肝细胞株HepG2为细胞模型，利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH )测定法及Hoechst染色法检测GSSG、TNF-α作用后细胞培养液中LDH活性及细胞凋亡情况。通过蛋白免疫印迹法(western blot，WB)检测细胞中蛋白质谷胱甘肽化水平、IκB激酶β(inhibitor kappa B kinase-β，IKK-β)蛋白表达水平及其磷酸化水平。通过酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测GSSG、还原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)水平及NF-κB(P65)的结合活性。并利用实时定量荧光PCR(real time PCR，RT-PCR)检测NF-κB目标基因的表达情况。[结果](1)H2O2作用后可显著提高HepG2细胞内GSSG水平。(2)GSSG可以显著增加HepG2细胞对TNF-α杀伤作用的敏感性。(3)GSSG通过氧化巯基使蛋白质谷胱甘肽化水平显著升高。(4)GSSG抑制HepG2细胞内TNF-α介导的NF-κB活化。(5)GSSG通过谷胱甘肽化修饰IKK-β抑制NF-κB的活性。[结论]氧化应激产物GSSG通过抑制TNF-α介导的NF-κ

作者：丁蕾；张福利；丁滨；潘然；胡林峰；窦晓兵

来源：浙江中医药大学学报 2016 年 40卷 9期