目的:研究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)刺激自然杀伤(natural killer,NK)细胞产生肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的作用机制.方法:采用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法,分离得到高纯度的NK细胞;乳酸脱氢酶释放法检测NDV激活的NK细胞对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用;实时荧光定量-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测 NDV刺激NK细胞4h后对TRAIL mRNA表达水平的影响;FCM检测NDV刺激NK细胞16 h时TRAIL蛋白的表达情况;ELISA法检测NDV刺激NK细胞后对其分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响;最后采用抗IFN-γ抗体中和IFN-γ后,再采用FCM检测NDV刺激的NK细胞中TRAIL蛋白的表达情况.结果:FCM检测结果显示,分离得到的NK细胞的纯度达(90.60±1.15)%:NDV刺激NK细胞16h后,明显增强NK细胞的杀伤肿瘤作用,NDV效价为204.8 HU刺激组的杀伤率达到(22.28±0.84)%;RFQ-PCR及FCM检测结果显示,不同效价的NDV刺激NK细胞后,NK细胞中TRAIL mRNA及蛋白表达水平均明显升高;ELISA检测结果显示,NDV刺激NK细胞后IFN-γ的分泌水平明显增加,在NDV效价为25.6HU刺激16 h时达到峰值(796.47±37.87) pg/mL;采用抗IFN-γ抗
作者:殷君;王立芳;樊晓晖;梁莹;肖庆;宋德志;高灵茜;赖振屏
来源:肿瘤 2012 年 32卷 12期