[目的]研究荧光素酶作为报告基因在活体定量和定位监测转基因人胚胎干细胞移植的动向的可行性.[方法]酶切pGL3 base质粒获得荧光素酶基因,酶切LTBR-uGIP获得载体骨架,连接荧光素酶基因和载体骨架构建慢病毒载体pULP,按照常规方法包装和扩增.ULP转导293T细胞以检测其荧光素酶的表达.人胚胎干细胞H9(P40)以W3R细胞为饲养层常规培养,人胚胎干细胞转导iDuet101-IDO(吲哚胺2.3双氧化酶,IDO)或iDuet101-CTLA4Ig(细胞毒性T细胞相关分子4免疫球蛋白,CTLA4Ig),经过筛选后再次转导ULP,即iDuet101-ULP(有荧光素酶表达)、iDuet 101-CTLA4Ig-ULP(有荧光素酶和CTLA4Ig表达),iDuet101-IDO-ULP(有荧光素酶和IDO表达).经过2次转导的3组人胚胎干细胞分别移植于5只BALB/C小鼠(实验组,共15只)和2只RAG,/-/-γC-/-小鼠(对照组,共6只),在注射后当日、3、5、7、14、21 d和28 d检测荧光素酶信号.[结果]在体外最少22 000个两次转导外源基因的人胚胎干细胞可检测到荧光信号.异种移植只需要5×106的细胞即可检测到荧光信号,iDuet 101-CTLA4Ig-ULP组与iDuet101-IDO-ULP组RAG-/-γC-/-小鼠在移植后荧光信号逐渐增强,观察期间逐渐上升到3×107电子和1.5×107电子,iDuet101-ULP组两只RAG-/-γC-/-小鼠在移植后第7天因伤口感染退出实验.3

作者：蔡柳洪；周灿权；张滨

来源：中山大学学报（医学科学版） 2009 年 30卷 2期