目的:在以往动物实验发现邪毒证肝癌小鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)前体阿黑皮素原(Pome)表达均降低,而血液ACTH表达异常升高且伴随昼夜节律通路和蛋白激酶A (PKA)通路均较活跃；这种情况推测与邪毒证肝癌小鼠垂体Pomc与ACTH并不同步发生变化,而其ACTH的异常升高可能与CRH释放频率增加有关,PKA通路参与介导此过程.鉴此,本项目在体外观察CRH释放频率改变对垂体细胞ACTH分泌和Pomc表达的影响,以及PKA通路在此过程中的作用,以探索CRH致邪毒证肝癌小鼠垂体ACTH调控异常的部分机制.方法:体外培养特异性分泌ACTH的小鼠垂体瘤细胞株AtT20,①分别观察0nM、25nM、50nM、100nM、200nM、400nM的CRH刺激细胞15分钟、30分钟、60分钟和90分钟后ACTH含量和Pomc表达的变化,发现25nM的CRH刺激60分钟时ACTH含量最高,而Pomc是在400nM的CRH刺激15分钟时表达最高；②在60分钟内,以CRH刺激细胞1～5次,每次均为25nM,发现使ACTH含量和Pomc表达最高的刺激次数分别为2次和3次；③往细胞中预先加入30μM的PKA抑制剂H89,30分钟和60分钟时各加入25nM的CRH刺激细胞,90分钟时检测细胞ACTH含量和Pomc的表达.结果:PKA被抑制后,细胞ACTH含量明显低于未被抑制者,但仍高于空白对照组；而给予CRH刺激后
作者：刘小美；方肇勤；吴中华；梁超
来源：中西医结合肝病杂志 2013 年 23卷 4期
