目的:探讨葛根素对子宫内膜RL95-2细胞P450芳香化酶(aromatase P450,P450arom)表达的影响及其对RL95-2细胞P450arom基因表达的调控作用.方法:将梯度稀释的葛根素在不同时间点加入RL95-2细胞中,分别采用实时聚合酶链反应(real-timepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测药物对RL95-2细胞P450arom-Mrna表达水平的影响.以人类基因组DNA为模板扩增人P450arom组织特异性启动子2(PⅡ)转录起始位点上游序列.PCR产物定向克隆到报告基因载体Pgl3-Basic中,构建人P450aromPⅡ系列报告基因质粒,并经限制性内切酶消化鉴定和基因测序证实.瞬时转染系列重组质粒至RL95-2细胞,加入葛根素刺激,分析相关转录因子,利用RT-PCR及Western blotting方法检测相关转录因子在葛根素作用下Mrna及蛋白表达的变化.结果:与溶剂对照组比较,低浓度葛根素会抑制P450aromMrna表达(P<0.01),抑制作用在6、12 h较显著(P<0.01).经酶切鉴定、基因测序、转录因子分析及启动子活性测定,成功构建了人P450aromPⅡ系列重组质粒(-1 017,-763,-543,-234～+8 bp).瞬时转染系列质粒至细胞中,于12 h后加入葛根素(10-7 mol/L)刺激,又12 h后检测荧光蛋白水平.结果表明,-763～-543 bp间的活性被抑制(P<0.05),通过转录因子分析找到了-410/-401 bp的AP-1(c-jun/

作者：李燕巍；蔡在龙；沈慰；杨生生；俞超芹

来源：中西医结合学报 2008 年 6卷 10期