目的 构建腺病毒载体使其携带血管紧张素转换酶(ACE)基因短发夹RNA(shRNA),观察选择性下调大鼠血管平滑肌细胞ACE表达.方法 从之前构建的真核表达载体p-ACE-shRNA中扩增ACE-shRNA片段,采用RT-PCR法并克隆进穿梭质粒pDC316中,将构建好的pDC316-ACE-shRNA穿梭质粒载体和pBHGlox-E1,3Cre骨架病毒共转染293细胞,进行病毒颗粒包装重组、滴度测定和纯化.随后进行原代培养大鼠血管平滑肌细胞转染,通过实时荧光定量PCR分别在转柒前及转染后24h、48h、72 h检测ACE mRNA的表达.结果 经PCR检测证实携带ACE-shRNA重组腺病毒载体构建成功并制备出了高滴度重组病毒,大鼠血管平滑肌细胞被转染后24 h,ACE mRNA表达无明显变化;被转染后48h,ACE mPNA表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);被转染后72h时ACE mRNA表达更低.结论 本实验成功构建重组腺病毒载体其携带ACE-shRNA片段,同时证实shRNA可选择性下调原代培养大鼠血管平滑肌细胞上ACE表达,可能为心血管病基因治疗提供新思路.
作者：周华；张翠芳；陈瑞瑞；高奋；杨志明
来源：中西医结合心脑血管病杂志 2017 年 15卷 22期
