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目的 研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制.方法 从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染.应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达.分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9% NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+ 3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9% NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA.Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κcB)蛋白表达.ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 ①A组和B组TLR4mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.05).②D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P<0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P<0.05).E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P<0.05);与G组

作者:陆梦茹;朱祖福;张慧萍;孔玉;高志强;杨江胜;陆强彬;柏燕燕;周国庆;沈丽萍

来源:中西医结合心脑血管病杂志 2019 年 17卷 5期

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陆梦茹;朱祖福;张慧萍;孔玉;高志强;杨江胜;陆强彬;柏燕燕;周国庆;沈丽萍
来源:
中西医结合心脑血管病杂志 2019 年 17卷 5期
标签:
脑出血 TLR4 小胶质细胞自噬 核转录因子 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β 白细胞介素-6
目的 研究TLR4介导小胶质细胞自噬在脑出血后炎症反应的作用机制.方法 从C57BL/6J小鼠中提取分离原代小胶质细胞,分组1中,A组:小胶质细胞;B组:小胶质细胞+阴性siRNA转染;应用C组:小胶质细胞+TLR4-siRNA转染.应用Q-PCR和Western Blot检测分组1中TLR4的表达.分组2中,D组:小胶质细胞+等量的对照溶剂(0.9% NaCl);E组:小胶质细胞+自噬抑制剂(3-MA);F组:小胶质细胞+control-siRNA+ 3-MA;G组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+等量的对照溶剂(0.9% NaCl);H组:小胶质细胞+TLR4-siRNA+3-MA.Western Blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TLR4、MyD88和核转录因子(NF-κcB)蛋白表达.ELISA检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平.结果 ①A组和B组TLR4mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与B组相比,C组TLR4 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.05).②D组、E组和F组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平无明显变化(P>0.05);与D组相比,G组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P<0.05);与F组相比,H组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平下调(P<0.05).E组和F组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平无明显变化(P>0.05);与F组相比,H组LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降(P<0.05);与G组