目的 针对Rab25基因3'端非翻译区(untranslated region,3'UTR)构建Rab25荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-125a-5p在肺癌耐药中调控其靶基因RAB25提供有效的工具.方法 PCR扩增包含Rab25的3'UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体GV306,构建GV306/Rab25' UTR载体;通过TrgetScan Release 6.2查找Rab25与miR-125a-5p结合区域并设计突变序列,参照构建GV306/Rab25' UTR载体方法构建GV306/Rab25' UTR突变载体.结果 通过获得Rab25与miR-125a-5p的种子区域及侧翼部分120 ～ 126 nt,并上下延伸150 bp,合成Rab25' UTR,并且在120 ～ 126 nt区域设计突变序列,构建了GV306/Rab25 3'UTR及其突变载体.结论 成功构建了含Rab25基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,为进一步研究Rab25在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药中的作用打下基础.
作者：周建国；张钰；吕水萍；王菲；王怡；柏玉举；苟晓丽；张廷友；沈刚
来源：遵义医学院学报 2016 年 39卷 1期
