目的 通过对人乳腺癌原代细胞组织块培养方法进行改良,建立一种快速高效可获得高纯度的人乳腺癌细胞原代培养方法,为乳腺癌深入研究提供实验基础.方法 取经临床病理诊断确诊为乳腺导管原位癌患者的癌组织标本,所有样本随机分为改良组(全程正置培养瓶进行培养,原代细胞铺满瓶底50％左右,用延长酶消化时间差法一次性纯化原代细胞)和传统组(翻转培养瓶倒置孵箱1～2h后,再正置培养瓶培养,原代细胞铺满瓶底80％ ～ 100％时,用反复酶消化时间差法纯化原代细胞).在倒置显微镜下观察,比较两组原代细胞爬出时间、爬出数量和贴壁生长情况;细胞计数比较两组组织块培养7d后获得贴壁细胞总数;免疫组化和流式细胞术鉴定、比较两组纯化后原代细胞的纯度;MTT法检测两组纯化培养48 h后贴壁细胞的活性.结果 经改良组织块培养法2d后,见大量细胞从组织块四周爬出,培养3d后见爬出原代细胞贴壁生长,胞质展开,培养5d后见细胞融合贴壁生长,铺满瓶底50％左右;而传统组织块培养法培养2d后见少量细胞爬出,培养5d才见少量细胞贴壁生长,培养10d后原代细胞方可铺满瓶底50％左右;人乳腺癌原代细胞培养7d贴壁细胞总量,改良组为(9.88 +0.20) ×105个,传统组为(4.88 +0.21) ×105个;纯化后改良组细胞纯度为(99.13 +0.06)％,传统组为(75.72±
作者：王敏；陆祥；曾峰；檀军；侯泽宇；陈伟
来源：遵义医学院学报 2019 年 42卷 4期
