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目的 探讨加味丹参饮治疗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机制.方法 将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为6组,每组6个复孔.空白血清组在含15%空白血清培养液中常规培养29h;缺氧预处理组更换缺氧培养液缺氧20 min,复氧20 min,再缺氧20 min后换为空白血清培养液常规培养24h,缺氧2h,再给氧3 h;缺氧/复氧组在含15%空白血清培养液中常规培养24 h,更换缺氧培养液,缺氧2h,再给氧3h;含药血清组在含15%药物血清中常规培养24h,缺氧2h,再给氧3h;含药血清+自噬抑制剂组用3-甲基腺嘌呤10 mmol/L预处理30 min,余同含药血清组;含药血清+自噬激动剂组用雷帕霉素100 nmol/L预处理30 min,余同含药血清组.倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化,比色法检测定各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量变化,Western blot法检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin1表达.结果 与空白血清组比较,缺氧/复氧组镜下心肌细胞变性坏死程度增加,电镜下有少量自噬体,培养液中LDH漏出率增加,Beclin1蛋白水平增加(P<0.05或P<0.01);与缺氧/复氧组比较,含药血清组及含药血清+自噬激动剂组镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,电镜下自噬体数量增多,培养液中LDH漏出率显著降低,LC3Ⅱ及Beclin1蛋白表

作者:饶春梅;成细华;任婷;孙彦波;彭霞;黄政德

来源:中医杂志 2017 年 58卷 12期

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作者:
饶春梅;成细华;任婷;孙彦波;彭霞;黄政德
来源:
中医杂志 2017 年 58卷 12期
标签:
心肌缺血 加味丹参饮 再灌注损伤 心肌细胞 缺氧/复氧损伤 自噬 ischemia myocardial Jiawei Danshen Yin (加味丹参饮) reperfusion injury cardiac muscle cell hypoxia/reoxygenation injury autophagy
目的 探讨加味丹参饮治疗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机制.方法 将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为6组,每组6个复孔.空白血清组在含15%空白血清培养液中常规培养29h;缺氧预处理组更换缺氧培养液缺氧20 min,复氧20 min,再缺氧20 min后换为空白血清培养液常规培养24h,缺氧2h,再给氧3 h;缺氧/复氧组在含15%空白血清培养液中常规培养24 h,更换缺氧培养液,缺氧2h,再给氧3h;含药血清组在含15%药物血清中常规培养24h,缺氧2h,再给氧3h;含药血清+自噬抑制剂组用3-甲基腺嘌呤10 mmol/L预处理30 min,余同含药血清组;含药血清+自噬激动剂组用雷帕霉素100 nmol/L预处理30 min,余同含药血清组.倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化,比色法检测定各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量变化,Western blot法检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin1表达.结果 与空白血清组比较,缺氧/复氧组镜下心肌细胞变性坏死程度增加,电镜下有少量自噬体,培养液中LDH漏出率增加,Beclin1蛋白水平增加(P<0.05或P<0.01);与缺氧/复氧组比较,含药血清组及含药血清+自噬激动剂组镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,电镜下自噬体数量增多,培养液中LDH漏出率显著降低,LC3Ⅱ及Beclin1蛋白表