目的 探索组织工程骨体内成骨时,CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性,为种子细胞的体内转归研究提供标记方法.方法 分离比格犬BMSCs,成骨诱导至第2代,用荧光染料CM-DiI进行细胞标记.荧光倒置显微镜观察标记后的细胞形态,MTT比色法测定标记前后BMSCs的增殖状况,检测标记前后Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨钙素(BGLAP)和骨黏连蛋白(SPARC)的表达.最后,CM-DiI荧光标记后的BMSCs与β-TCP复合共培养后植入比格犬背部皮下,8周后取材,荧光显微镜下观察BMSCs体内转归,HE染色观察异位成骨情况.结果 CM-DiI标记后早期细胞呈现红色荧光,48 h后荧光增强,72 h内荧光强度无明显减弱.BMSCs在CM-DiI标记前后细胞形态基本一致,两组间细胞的增殖率无明显差别;标记后RT-PCR检测Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC表达,显示标记后的BMSCs亦可向成骨方向分化.扫描电镜检测到标记后细胞在β-TCP上增殖良好,细胞基质分泌丰富.细胞-支架复合物植入比格犬皮下,8周后荧光显微镜观察到标记细胞仍存在,且HE染色可见支架孔隙中有类骨基质沉积.结论 CM-DiI对BMSCs的生长增殖、成骨分化无明显影响,对体内组织工程骨中BMSCs的示踪时间可长达8周,可用作体内细胞的长效示踪剂.
作者：解芳；靳小雷；徐家杰；卢建建；张超；曾海峰；许美邦；田甜；滕利
来源：组织工程与重建外科杂志 2012 年 08卷 4期
