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目的 探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系.方法 2018年5月至2019年12月,建立H/R H9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组.用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/R H9C2细胞.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中miR-138-5p、KLHDC10、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性.结果 H/R组于对照组,H/R H9C2细胞中miR-138-5p的表达水平明显降低[(0.34±0.03)比(1.00±0.11)],KLHDC10的表达水平明显升高,细胞存活率显著降低[(62.03±6.20)%比(100.04±10.05)%],凋亡率显著升高[(28.16±2.82)%比(7.22±0.72)%],同时下调cyclin D1、上调cleaved-caspase-3的蛋白水平(P<0.05).过表达miR-138-5p、抑制KLHDC10可明显促进H/R H9C2细胞存活,抑制凋亡,上调cyclin D1、下调cleaved-caspase-3的蛋白水平.miR-138-5p

作者:杜虹;张志远;谷小卫;董自超

来源:安徽医药 2022 年 26卷 3期

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作者:
杜虹;张志远;谷小卫;董自超
来源:
安徽医药 2022 年 26卷 3期
标签:
心肌再灌注损伤;微小RNA-138-5p;Kelch重复蛋白;缺氧/复氧H9C2;细胞存活;细胞凋亡
目的 探讨微小RNA(miRNA/miR)-138-5p、Kelch重复蛋白(KLHDC10)在缺氧/复氧(H/R)心肌细胞H9C2中增殖、凋亡的功能及二者的作用关系.方法 2018年5月至2019年12月,建立H/R H9C2细胞模型;正常培养的H9C2细胞记为对照组.用miRNA阴性对照(miR-con)、miR-138-5p模拟物(miR-138-5p mimics)、过表达空载体(pcDNA-con)和KLHDC10过表达载体(pcDNA-KLHDC10)不同处理方法处理H/R H9C2细胞.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中miR-138-5p、KLHDC10、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞的存活和凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光素酶活性.结果 H/R组于对照组,H/R H9C2细胞中miR-138-5p的表达水平明显降低[(0.34±0.03)比(1.00±0.11)],KLHDC10的表达水平明显升高,细胞存活率显著降低[(62.03±6.20)%比(100.04±10.05)%],凋亡率显著升高[(28.16±2.82)%比(7.22±0.72)%],同时下调cyclin D1、上调cleaved-caspase-3的蛋白水平(P<0.05).过表达miR-138-5p、抑制KLHDC10可明显促进H/R H9C2细胞存活,抑制凋亡,上调cyclin D1、下调cleaved-caspase-3的蛋白水平.miR-138-5p