目的:探讨CRISPR/Cas9介导酪氨酸激酶抑制剂(TKI)对非小细胞肺癌基因靶向吉非替尼耐药敏感性的影响,并阐明其机制.方法:利用CRISPR/Cas9系统建立酪氨酸激酶(TKs)敲除A549细胞株,按照TKI表达情况分为A549、A549TKs /+和A549TKs /细胞株.Western blotting法检测细胞株中P53、MDM2、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,CCK-8法检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞活性,细胞划痕实验检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株的细胞迁移情况,流式细胞术检测A549、A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞集落形成情况.结果:CRISPR/Cas9系统成功建立了TKs敲出A549细胞株,A549、A549TKs/+和A549TKs /细胞活性比较差异无统计学意义(P＞0.05);3种细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.05),细胞迁移情况变化不大.经6 mol· L-1吉非替尼干预72 h后,与A549细胞株比较,A549TKs/+和A549TKs /细胞株的细胞活性降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P＜0.05),细胞迁移能力明显减弱;与A549细胞株比较,A549TKs-/+和A549TKs-/-细胞株中P53和Bax蛋白表达水平降低(P＜0.05),MDM2和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),细胞集落生成率明显降低(P＜0.05).结论:采用吉非替尼对敲除A549细胞株进行干

作者：任爱华；王大伟

来源：吉林大学学报（医学版） 2019 年 45卷 6期