研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响.方法提取HUVECs总RNA,利用RT - PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1-3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1 - sKDR转染Lewis肺癌细胞；采用RT -PCR和SDS - PAGE方法检测sKDR在基因和蛋白水平上的表达情况；将转染重组质粒的细胞上清液加至血管内皮生长因子(VEGF)诱导的HUVECs培养基中,采用MTT法检测转染细胞上清液对VEGF诱导的HUVECs增殖的影响.结果经酶切鉴定及基因测序证实成功获得了重组质粒pcDNA3.1 - sKDR;重组质粒成功转染Lewis肺癌细胞,经RT - PCR和SDS - PAGE方法证实sKDR在基因和蛋白水平上均获得了成功表达；转染的含sKDR的Lewis肺癌细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖.结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1 - sKDR,sKDR在真核系统中获得了有效表达,且表达的蛋白对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖有明显抑制作用.
作者：刘洪；毛淑华；邓丽聪；姬玲玲；徐一洲；黄英
来源：华西药学杂志 2011 年 26卷 4期
