目的：建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的PCR方法。方法：根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶（nitrate reductase，narGHJI）基因启动子区215位上T-C的转换，设计巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型，测定其敏感性，并用琼脂糖凝胶电泳验证观察巢式荧光PCR产物的特异性。以人型结核杆菌标准株（H37 Ra）、卡介苗培养菌液、人型临床分离株和牛型临床分离株为标本，高分辨熔链曲线分析结核分枝杆菌亚型正态化熔链曲线及熔链温度。结果：巢式荧光PCR特异性地检出结核分枝杆菌narGHJI基因，其敏感性比荧光定量PCR高10倍左右；人型及牛型结核分枝杆菌narGHJI基因PCR产物的高分辨熔链曲线分成2个不同组合，熔链温度分别为（83．08±0．08）℃和（83．96±0．09）℃，差异有统计学意义（t＝217．23，P＜0．05）。结论：成功建立检测结核分枝杆菌及其亚型的巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线法。
作者：邵雪君；朱宏；黄莉莉；陶云珍；徐俊；何萍；汪健
来源：江苏大学学报（医学版） 2015 年 4期
