目的 构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E5蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E5,分析E5在HeLa细胞及BALB/c小鼠肌肉组织中的表达.方法 设计HPV16 E5基因引物,PCR扩增E5基因,经BamHI、EcoRI酶切后将其连接入pcDNA3.1(+),PCR及双酶切筛选阳性克隆并测序.将构建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5转染HeLa细胞,利用RT-PCR测定HPV16 E5 mRNA表达.将6只BALB/c小鼠分为3组,分别取100 mg pcDNA3.1(+)/HPV16 E5、100 mg pcDNA3.1(+)、100 mL PBS经肌肉注射小鼠,2周1次,共4次；末次接种后第14天取小鼠股四头肌制成石蜡切片,免疫组织化学法检测E5蛋白在小鼠肌肉组织中的表达.结果 PCR扩增得到252 bp HPV16E5基因片段,DNA测序结果显示E5基因片段正确地连入pcDNA3.1(+).构建的pcDNA3.1(+)/HPV16 E5在HeLa细胞表达大小为252bp的HPV16 E5 mRNA.小鼠股四头肌细胞膜被染成棕黄色.结论 构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E5能在HeLa细胞及小鼠肌肉组织中表达HPV16 E5蛋白.
作者：屈巾力；李薇；龙敏芝；苏贤；许骞；唐双阳；陈熙
来源：中南医学科学杂志 2011 年 39卷 5期
