肝脏铁过载是血液系统疾病患者进行骨髓移植后的典型并发症之一，长期铁过载可引发肝脏细胞凋亡和器官损坏，然而铁过载的分子调控机理迄今仍不清楚。以培养的枸橼酸铁铵过载人肝细胞HH4和正常人肝细胞HH4为研究对象，细胞裂解提取总蛋白，分子筛超滤管分离获得总糖肽，PNGase F酶解释放出N-糖链，Sepharose 4B除盐纯化N-糖链，再利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术比较N-糖链变化情况。同时，采用荧光细胞凝集素免疫组化方法验证糖链分析结果。结果在铁过载人肝细胞和正常细胞中均检测到16种N-糖链，但糖链丰度存在明显差异。与正常人肝细胞相比，铁过载人肝细胞中高甘露糖型糖链的含量降低，而杂合型、复杂型、平分型、岩藻糖化和唾液酸化糖链的含量明显升高。凝集素免疫组化结果显示铁过载后细胞对凝集素ConA的亲和作用减弱，而对PHA-E、AAL、LCA和MAL-II的亲和作用增强，与糖链质谱分析结果相一致。研究为进一步探索人肝细胞铁过载模式下N-糖链表达差异的分子机理提供了技术支持。
作者：李士伟；关锋；李想
来源：生物学杂志 2015 年 3期
