目的 建立人乳酸脱氢酶B(LDHB)体外抑制剂筛选模型. 方法 用一对5′端分别带NdeⅠ、XhoⅠ位点的引物扩增LDHB cDNA.LDHB cDNA经NdeⅠ+XhoⅠ双酶切后与同样酶切的pET-28a质粒连接,连接产物转化大肠杆菌DH5α.将筛选的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用0. 2 mmol/L IPTG诱导LDHB表达,镍离子亲和层析柱纯化LDHB.以丙酮酸钠和NADH为底物,通过检测340 nm波长处光密度值的变化,确定LDHB及其抑制剂棉酚的最适浓度,并计算模型的Z因子.结果 LDHB的表达量为25 mg/L,LDHB、棉酚的最适浓度分别为22. 5 μg/L、10 μmol/L,筛选模型的Z因子为0. 91. 结论 建立了成本低、可靠性强、适合高通量的LDHB体外抑制剂筛选模型.
作者：吴珊；刘洁；金科华
来源：山西医科大学学报 2018 年 49卷 6期
