目的:目前有关骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化的研究较少.本实验分离和培养人骨髓间充质干细胞,用带有VEGF165的质粒转染人骨髓间充质干细胞,探讨血管内皮生长因子对其体外诱导分化的作用.方法:实验于2005～04/2006-04在吉林大学人兽共患病教育部重点实验室完成.取成人的已排除血液系统肿瘤疾病的新鲜骨髓(自愿提供),采用Percoll梯度分离培养骨髓间充质干细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态变化和生长情况.原代细胞培养至增殖接近融合状态时,单克隆培养法分离传代培养,扩增骨髓间充质干细胞.采用流式细胞术检测细胞免疫学表型.在原核细胞大肠杆菌DH5α中复制扩增和提取,纯化、克隆pcDNA3.0-VEGF165质粒.用脂质体转染法转染骨髓间充质干细胞.应用流式细胞术检测诱导后骨髓间充质干细胞免疫学表型变化.并采用免疫荧光染色鉴定转染情况,并设质粒空载和未转染的骨髓间充质干细胞为对照.结果:人骨髓间充质干细胞原代培养1周后,造血细胞消失,贴壁细胞体积增大,呈现梭形外观,有粗大的细胞突起伸出.2周后细胞融合成单层,梭形突起变长,排列有明显的方向性,细胞排列成旋涡状、网状、辐射状.流式细胞术显示,人骨髓间充质干细胞免疫学表型CD44、CD29阳性,CD34、CD31、CD45阴性.VEGF165诱导骨髓间充质干细胞后CD44
作者：王培蕊；马学玲；王心蕊；文佳媚；陈柏竹；刘亢丁
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 46期
