背景：瓣膜间质细胞是心脏瓣膜中的主要细胞成分，成肌纤维细胞是一种能够表达平滑肌α-平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原纤维，并具有一定分化潜能的重要的瓣膜间质细胞，不仅在瓣膜的结构中起着支架作用，尤其在瓣膜的正常生理以及病理应答过程中发挥着重要的调控作用。<br> 目的：建立一套可靠的心脏瓣膜成肌纤维细胞分离、原代培养与鉴定的方法，为心瓣膜钙化等疾病的进一步研究奠定基础。<br> 方法：①从猪心中获取主动脉辨，分别用酶联和消化法、普通酶消化法以及组织块种植法提取猪主动脉瓣瓣膜成肌纤维细胞，进行原代培养；②显微镜观察3种方法培养出的成肌纤维细胞的活性和形态；③用光学显微镜和免疫细胞化学方法鉴定细胞。<br> 结果与结论：①3种方法中，利用胰酶和胶原酶Ⅱ联合消化，然后迅速终止消化的方法获得成肌纤维细胞的活性更高，状态更好，纯度更高；②在荧光显微镜下，观察到获得的主动脉瓣成肌纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白染色阳性，抗血管性血友病因子染色阴性，提示培养的细胞为成肌纤维细胞。
作者：刘凤丹；胡伟林；陈正平；李永胜
来源：中国组织工程研究 2016 年 20卷 51期
