背景:研究显示低氧能刺激骨髓间充质干细胞增殖,但具体机制尚不清楚.ROCK信号对细胞增殖、凋亡等具有重要影响,当前对ROCK信号与骨髓间充质干细胞的生物学功能研究较少.目的:分析ROCK信号在低氧诱导c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖及旁分泌中的作用.方法:贴壁法获得大鼠股骨骨髓间充质干细胞,应用磁激活细胞分选法获得c-Kit+亚群,细胞培养于常氧(体积分数21％O2)及低氧(体积分数2％O2)条件下,并用ROCK信号抑制剂Fasudil(10μmol/L)处理细胞.观察:①Western blot检测p-MLC2(T18/S12)和MLC2蛋白表达,以p-MLC2(T18/S12)/MLC2比值变化反映ROCK信号的活化情况;②细胞计数分析细胞增殖,Western blot检测细胞增殖标记物PCNA和细胞周期相关蛋白的表达;③流式细胞术检测细胞周期的变化;④ELISA检测细胞培养上清中血管内皮生长因子、转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子水平,了解细胞的旁分泌情况.结果与结论:成功分选出大鼠c-Kit+骨髓间充质干细胞.①相对于常氧而言,低氧显著下调MLC表达和上调p-MLC(T18/S19)表达进而增加p-MLC(T18/S19)/MLC2比值;②低氧促进c-Kit+骨髓间充质干细胞的增殖,表现为细胞数量增多和PCNA蛋白表达上调,Fasudil减弱了低氧诱导的c-Kit+骨髓间充质干细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期并抑制CDK
作者：邵钟铭；王可可；廖晓敏；哈艳平；李汝佳；申志华；揭伟
来源：中国组织工程研究 2019 年 23卷 21期
