MC1R(melanocortin 1 receptor)基因编码黑皮质素1型受体,它在配体α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte stimulating hormone,α-MSH)的刺激下,可促进细胞内cAMP(cyclic adenosine monophosaphate)的生成,从而激活PKA(protein kinase A system)信号通路,促进黑色素合成调控的关键转录因子–小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF),以及限速酶–酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)的表达,进而调控真黑素和褐黑素的合成,影响动物的毛色表型.有研究表明,杜洛克猪(Susscrofa domestica)MC1R蛋白第6个跨膜结构域(transmembrane domain 6,TM6)发生了A243T突变,该突变可能影响MC1R蛋白生物学功能,被认为是导致杜洛克猪红毛表型的主要因素,然而却一直未被验证过.因此,本研究以单链寡核苷酸(single-stranded oligo-deoxyribonucleotides,ssODN)作为同源重组模板,利用CRISPR/Cas9技术在人类黑色素瘤细胞系SK-MEL-2中引入MC1R基因的c.727G>A(A243T)突变,以分析其对MC1R功能的影响.结果表明ssODN发生同源重组的效率可达10％.通过对共转染ssODN和CRISPR/Cas9表达载体的细胞进行筛选和培养,获得6个单克隆细胞株,进行测序鉴定,结果未能筛选到发生预期突变的单克隆细胞株,所有单克隆细胞株皆在目

作者：张充；魏子璇；王敏；陈瑶生；何祖勇

来源：遗传 2022 年 44卷 7期