目的:建立系统的血管性血友病(vWD)实验诊断和研究的方法,对7个遗传性vWD家系进行系列的实验诊断和分子发病机制研究.方法:自行建立瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验(RIPA)、血管性血友病因子(vWF)瑞斯托霉素辅因子(vWF:RCo)、vWF抗原(vWF:Ag)、vWF胶原结合试验(vWF:CB)和多聚体分析方法,对vWD患者及家系成员进行测定.采用PCR产物测序以鉴定vWF基因缺陷.采用定点突变、剪接位点分析、序列复杂性分析和核基质结合区评分等生物信息学方法,研究基因突变对蛋白功能的影响.结果:明确诊断vWD患者1型1例,2A型2例,2B型1例,2M型1例及3型2例,其中1型、2M型和2B型vWD为国内首次报道.鉴定到10个基因突变,其中6个为国际上首次发现.体外表达实验显示,R1374S突变引起细胞分泌下降;R1308C突变导致蛋白功能降低;C2327S突变影响多聚体形成.结论:本研究建立的方法和推荐的组合实验适合于绝大多数vWD患者的诊断和分型需要.R1374S、R1308C和C2327S突变分别导致患者出现1型、2B型和2A型vWD表型.插入、缺失和无义突变诱发无义介导的mRNA衰变(NMD),导致vWF合成减少,是本研究中3型患者的发病机制.
作者：谢飞；王鸿利；王学锋
来源：诊断学理论与实践 2006 年 5卷 5期
